Effect of Ions Released and pH of Two Glass Ionomer Cements in Human Gingival Fibroblasts / Efecto de la liberación de iones y pH de dos cementos de ionómero de vidrio en fibroblastos gingivales humanos

Abstract 20. Conventional glass ionomer cements are used as dental provisional restorative materials, which present several advantages such as adhesion to the tooth mineral phase among others. On the other hand, the knowledge about biological property of glass ionomers shows various approaches and results. In this work, it was studied the in vitro biological response of human gingival fibroblasts in contact with commercial cements of glass ionomer: Mirafil® and Ionglass® and with their extracts, according to ISO 10993. The extracts of the cements, in which the cells were cultured, were adjusted at different concentrations ranging 0.1% to 100%. The cellular metabolic activity of gingival fibroblasts was measured using the Alamar Blue® reagent. The results showed a significant effect on the cellular metabolic activity correlated with the concentration of liberated ions (Al³+ and Ca²+) for both ionomers, as well as the pH variations of the culture media. This could mean that the cellular metabolic activity is substantially influenced by ions and pH of the cell culture.

Resumen 24. Los cementos de ionómero de vidrio convencionales se utilizan como materiales de restauración provisional para uso dental, los cuales presentan varias ventajas como la adhesión a la fase mineral de los dientes. Por otro lado, las propiedades biológicas de los ionómeros de vidrio muestran diversos enfoques y resultados. En éste trabajo se estudió la respuesta biológica in vitro de fibroblastos gingivales humanos en contacto con cementos comerciales de ionómero de vidrio: Mirafil® e Ionglass® y con sus respectivos extractos según la norma ISO 10993. Los extractos de los cementos en los que se cultivaron las células estaban en diferentes concentraciones: de 0.1% a 100%. La actividad metabólica celular se midió usando el reactivo Alamar Blue®. Los resultados mostraron un efecto significativo sobre la actividad metabólica celular correlacionada con la concentración de iones liberados (Al³+ y Ca²+) para ambos ionómeros, así como las variaciones de pH de los medios de cultivo. Ello podria explicar la influencia por los iones y el pH del cultivo celular en la actividad metabólica celular.

Inactivación in vitro de bacterias patógenas mediante el uso de ozono en diferentes tiempos de exposición / In vitro inactivation of pathogenic bacteria by the use of ozone in different exposure times

Intrdoduction: in the area of ​​health, ozone has many therapeutic properties. Several pathologies can be treated with ozone therapy, such as infectious, acute and chronic diseases caused by viruses, bacteria, fungi and parasites, autoimmune diseases, diseases with chronic ischemia, lung diseases, neuropathies, dermatological diseases, dental caries, among others. Objective: to evaluate the effect of ozone applied in vitro in the following strains: Escherichia coli CCCD E003, Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi CCCD S009, Staphylococcus aureus CCCD S003, Pseudomonas aeruginosa CCCD P013, Streptococcus mutans ATCC 25175 and Enterococcus faecalis ATCC 18211. For this purpose use was made of different cell concentrations and different times of exposure to ozone. Methods: we used concentrations of 1 x 102, 1 x 103, 1 x 10 4, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108 and 1 x 109 CFU/mL of NaCl (0.5 percent w/v) exposed to ozone for different time intervals (30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360, 390, 420, 450, 480, 510 and 540 s). Bacterial viability was determined by CFU and the colorimetric method with 2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride. Results: it was found that the species S. aureus, E. coli, S. typhi, S. mutans and E. faecalis were sensitive to ozone, showing a decrease of 45-80 percent of viable cells after 30 s of ozone exposure relative to the initial population, whereas P. aeruginosa was reduced 25 percent compared to the initial population. The viability of bacteria exposed to ozone was dependent on the cell concentration and time exposure. Conclusions: ozone had a bactericidal effect on the bacteria used in this study and that this effect was proportional to the concentration of bacterial cells and the time of exposure to O3. The results show significant efficacy of ozone to control populations of pathogenic bacteria, providing relevant information for its use in different areas, but always taking into account the microorganism involved(AU)

Introducción: el ozono tiene muchas aplicaciones terapéuticas en la esfera de la salud. Algunas patologías pueden tratarse con ozonoterapia, entre ellas enfermedades infecciosas, agudas y crónicas causadas por virus, bacterias, hongos o parásitos, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades con isquemia crónica, enfermedades pulmonares, neuropatías, enfermedades dermatológicas y caries dentales, entre otras. Objetivo: evaluar el efecto del ozono aplicado in vitro sobre las siguientes cepas: Escherichia coli CCCD E003, Salmonella enterica subesp. enterica serovar Typhi CCCD S009, Staphylococcus aureus CCCD S003, Pseudomonas aeruginosa CCCD P013, Streptococcus mutans ATCC 25175 y Enterococcus faecalis ATCC 18211. Con este propósito se utilizaron diferentes concentraciones celulares y diferentes tiempos de exposición al ozono. Métodos: utilizamos concentraciones de 1 x 102, 1 x 103, 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108 y 1 x 109 UFC/mL de NaCl (0,5 por ciento m/v) expuestas a ozono durante diferentes intervalos de tiempo (30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360, 390, 420, 450, 480, 510 y 540 s). La viabilidad bacteriana se determinó mediante UFC y el método colorimétrico con cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio. Resultados: se observó que las especies S. aureus, E. coli, S. typhi, S. mutans y E. faecalis eran sensibles al ozono, mostrando una disminución de 45-80 por ciento de las células viables luego de una exposición de 30 s al ozono en comparación con la población inicial, mientras que la especie P. aeruginosa se redujo en un 25 por ciento en comparación con la población inicial. La viabilidad de las bacterias expuestas al ozono dependió tanto de la concentración celular como del tiempo de exposición. Conclusiones: el ozono mostró tener un efecto bactericida sobre las bacterias utilizadas en el estudio, y ese efecto fue proporcional tanto a la concentración de las células bacterianas como al tiempo de exposición al O3. Los resultados demuestran la significativa eficacia del ozono para controlar poblaciones de bacterias patógenas, y ofrecen información relevante con vistas a su uso en diferentes áreas, pero siempre teniendo en cuenta el microorganismo en cuestión(AU)

Evaluación del efecto citotóxico de una resina dental a base de siloranos sobre fibroblastos L929 / Evaluation of the cytotoxic effect of a silorane-based dental resin on fibroblasts L929

Introducción: Las resinas dentales basadas en siloranos, son el resultado de la unión química de siloxanos y oxiranos. Dentro del proceso de evolución de las resinas, se han modificado sus formulaciones para optimizar sus propiedades físicas, mecánicas y estéticas. Sin embargo, aún presentan problemas como la contracción de polimerización, problemas alérgicos y toxicológicos. Objetivo: Determinar el potencial efecto citotóxico de las resinas a base de siloranos sobre la viabilidad celular en un cultivo de fibroblastos de la línea L929. Metodología: Se estudió la exposición de fibroblastos de ratón L929 a resinas dentales a base de siloranos Filtek p90 y metacrilatos Filtek p60 en tres tiempos de fotocurado durante 6 días. Se evaluó el efecto sobre la viabilidad celular mediante pruebas de exclusión vital, micrografías electrónicas y composición elemental de superficie (Mg, Na, K y Ca) por ESEM/EDAX. Resultados: La resina Filtek p90 mostró un mayor efecto citotóxico a tiempos de fotocurado prolongados (20 segundos o más) respecto a la resina Filtek p60. El efecto resultó más marcado para 20 segundos de fotocurado, ya que las concentraciones de Ca y K en la superficie celular fueron las más afectadas. Conclusiones: La resina dental Filtek p90 ejerce un efecto citotóxico relativamente bajo sobre las células de fibroblastos L929 (p <0.01). Su uso en la práctica odontológica se puede considerar bioseguro, pero un tiempo de fotocurado prolongado con la resina dental a base de siloranos puede afectar significativamente la viabilidad de los tejidos dentales.

Introduction: The resins dental based on siloranes, are the result of chemical bonding between siloxanes and oxiranes. In the process of evolution of the resins, they have changed their formulations to optimize their physical, mechanical and aesthetic properties. However have problems as polymerization shrinkage, allergic and toxicological problems. Objective: determine the potential cytotoxic effect of siloranes based resins on cell viability in cultured fibroblast line L929. Methodology: The exposure of mouse L929 fibroblasts to commercial dental resins based on either, methacrylate Filtek P60 or silorane Filtek P90 for three curing times was assessed throughout 6 days. Its effect on the cell viability was determined by vital exclusion tests, electron micrographs and ionic composition (Mg, Na, K and Ca) by ESEM/EDAX. Results: The dental resin Filtek p90 displayed a higher cytotoxic effect for prolonged curing times (20 seconds or more) than the resin Filtek P60. Moreover, such an effect was stronger at 20 seconds of curing, as long as the concentration of Ca and K on the cell's surface were the more affected. Conclusions: The dental resin Filtek p90 exerts a relatively low cytotoxic effect on L929 fibroblast cells (p < 0.01), and then, its use can be considered biologically safe in practical dentistry but a prolonged curing time of the silorane-based resin could significantly affect the viability of dental tissues.

Viabilidad de una bacteria láctica encapsulada e incorporada en una matriz de cobertura de chocolate / Viability of encapsulated lactic bacteria added in a matrix of chocolate coverage

Se evaluó la viabilidad durante el almacenamiento de Weissella confusa incorporada en una matriz de cobertura de chocolate. La bacteria probiótica se encapsuló empleando tres materiales de pared, gel de Aloe vera, gel Aloe vera + Almidón al 10 % y gel de Aloe vera + Almidón al 15 % y células libres como control. Posteriormente se liofilizó. La bacteria probiótica encapsulada, se incorporó en una matriz de cobertura de chocolate. Los chips se empacaron y almacenaron durante 5 semanas a 4 °C, cada semana se midieron cambios en la viabilidad de la bacteria probiótica y en la actividad de agua. En la quinta semana, los chips se sometieron a condiciones simuladas de jugos intestinales. Durante el almacenamiento los chips mantuvieron su carácter probiótico (>10(6) UFC/g), sin embargo, cuando la bacteria probiótica se encapsuló en gel aloe vera, se obtuvo mayor número de bacterias probióticas vivas dentro de la matriz sólida (2,1x10(8) UFC/g). La actividad de agua varió de 0,470 a 0,810. La bacteria probiótica permaneció viva por 2 horas en medios simulados de jugos intestinales, lo cual ratifica que la matriz sólida y los medios de encapsulación seleccionados son adecuados para el desarrollo de productos sólidos probióticos ricos en grasa vegetal.

Viability during storage of Weissella confusa incorporated in a chocolate coating matrix was evaluated. Probiotic bacteria was encapsulated using three wall materials, Aloe vera gel, Aloe vera gel + 10 % starch and aloe vera gel + 15 % starch and free cells as control. Subsequently lyophilized. Probiotic bacteria encapsulated, was incorporated into a chocolate coating matrix. The chips were packed and stored for 5 weeks at 4 °C, were measured weekly changes in viability of the probiotic bacteria and water activity. In the fifth week, the chips were subjected to simulated conditions of intestinal juices. During storage chips remained probiotic character (>10(6) CFU/g), however, if the probiotic bacteria are encapsulated in aloe vera gel, the greater number of living probiotic bacteria was obtained within the solid matrix (2,1x10(8) CFU/g ). Water activity ranged from 0.470-0,810. Probiotic bacteria remained alive for 2 hours in simulated intestinal fluid media, which confirms that the solid matrix and the selected encapsulation means are suitable for the development of solid product rich in vegetable fat probiotics.

Evaluation of two human dental pulp stem cell cryopreservation methods / Evaluación de dos métodos de criopreservación de células troncales de pulpa dental humana

La pulpa dental es una fuente promisoria de células madre mesenquimales para ser utilizadas en terapia celular y medicina regenerativa. El desarrollo de métodos que permitan almacenar las células madre con mínimo compromiso de la viabilidad celular, capacidad de diferenciación y función es necesario para aplicaciones clínicas e investigación. El objetivo de este estudio fue evaluar si las células troncales depulpa dental humana (hDPSCs) aisladas y criopreservadas durante 1, 7 y 30 días conservan la viabilidad y expresiónde marcadores específicos de células troncales pos crio-preservación. Para esto, las hDPSCs se aislaron de 23pacientes sanos entre 18 y 31 años. La pulpa dental se disoció enzimáticamente, y las células CD105+ se separaron mediante el sistema Miltenyi™. Posteriormente, las hDPSCs se criopreservaron utilizando el método de Kamath y de Papaccio, se evaluó la viabilidad pos crio-preservación porcitometría de flujo (7AAD) y la expresión de marcadores CD105+/ CD73+, CD34-/CD45-. El método de Papaccio, mostró mayor viabilidad celular a los 30 días (59,5 por ciento)comparado con el método de Kamath, a 1 día (65,5%) y 7 días (56%) respectivamente. Se observó mayor expresión de los marcadores CD105+/CD34- a 1 y 7 días pos-criopreservación con el método Kamath y CD105+/CD45- a los 3 tiempos decriopreservación. CD73+ presentó mayor expresión en las hDPSCs a las 24 horas y 7 días con el método de Kamath, y al mes con el método Papaccio. Estos resultados sugieren que las hDPSCs expresan marcadores de células troncales mesenquimales postcriopreservación. Sin embargo el tiempo de criopreservación podría modificar la expresión de los marcadores probablemente por alterarla configuración espacial de las proteínas de membrana celular; o por comprometer a las células a cierto grado de diferenciación.

Dental pulp is a promising source of mesenchymal stem cells for use in cell therapy and regenerative medicine. Methods for storing stem cells with minimum compromise of cell viability, differentiation capacity and function should be developed for clinical and research applications. The aim of this study was toevaluate whether human dental pulp stem cells (hDPSCs)isolated and cryopreserved for 1, 7 and 30 days maintain viability and expression of specific stem cell markers. Human dental pulp stem cells were isolated from 23 healthy patients aged 18 to 31 years. Dental pulp was enzymatically dissociated, and CD105+ cells were separated using the Miltenyi™ system.The hDPSCs were cryopreserved using the Kamath andPapaccio methods. Post-cryopreservation viability wasmeasured by flow cytometry (7AAD) and by the expression of the phenotype markers CD105+/ CD73+, CD34-/CD45-. The Papaccio method showed greater cell viability for cells that had been frozen for 30 days (59.5%) than the Kamath method (56.2%), while the Kamath method provided better results for 1 day (65.5%) and 7 days (56%). Post-cryopreservation expression of the markers CD105+/CD34- was greater after 1 and 7 days with the Kamath method and CD105+/CD45- were expressed after all 3 cryopreservation times. There was greaterexpression of CD73+ in the hDPSCs after 1 and 7 days with the Kamath method, and after 30 days with the Papaccio method. These results suggest that hDPSCs express mesenchymal stem cell markers after cryopreservation. However, cryopreservationtime may affect marker expression, probably by altering the spatialconfiguration of cell membrane proteins or by compromising cells at a certain level of differentiation.

Effects of spermicidal extracts of Ananas comosus (pineapple) and Sapindus saponaria (jaboncillo) on cell viability, cytotoxicity and apoptosis / Efecto del extracto espermicida de Ananas comosus y Sapindus saponaria sobre la viabilidad, la citotoxicidad y la apoptosis celular

Introduction: there are natural products from different fruits and plants that are effective as spermicides, but it is important that they should have little or no cytotoxic effect on epithelial cells. Currently available spermicides with nonoxynol-9 cause vaginal irritation and damage to the vaginal mucosa, the uterine epithelium, and the microbial flora of the vagina. Objective: to elucidate the effect on cell viability, cytotoxicity and apoptosis of spermicidal extracts of Ananas comosus (L.) Merr. and Sapindus saponaria L. over HeLa cell line. Methods: both extracts were evaluated on HeLa cell line using the novel ApoTox-Glo™ Triplex Assay to determine whether cell viability, cytotoxicity and apoptosis were affected. Results: it was determined that treatment with Sapindus saponaria and Ananas comosus extracts initially affected cell viability, but the latter tended to be restored. There was a sign of cell apoptosis that also tended to decrease over time. Conclusions: extracts of Sapindus saponaria and Ananas comosus may affect the survival of cells at the beginning, but these can continue replicating over time. There was a sign of cell apoptosis that also tended to decrease over time. Something similar happened to cell cytotoxicity, indicating that although the extracts may affect the survival of cells at the beginning (6 hours of treatment), these can continue dividing over time.

Introducción: diversos compuestos de procedencia natural como frutos y plantas son altamente efectivos como espermicidas, pero es necesario que estos no tengan efecto citotóxico sobre las células epiteliales. Los espermicidas disponibles actualmente sobre la base de nonoxinol-9, causan irritación y daño en la mucosa, el epitelio uterino y la flora microbiana de la vagina. Objetivo: determinar el efecto sobre la viabilidad, citotoxicidad y apoptosis celular de extractos con actividad espermicida de Ananas comosus (L.) Merr. y Sapindus saponaria L. sobre la línea celular HeLa. Métodos: ambos extractos se evaluaron sobre la línea celular HeLa para determinar el efecto en la viabilidad, la citotoxicidad y la apoptosis celular, utilizando el novedoso ensayo triple ApoTox-Glo™. Resultados: inicialmente el tratamiento con los extractos de Sapindus saponaria y Ananas comosus afectaron la viabilidad celular; sin embargo, esta tendió a restablecerse y mantenerse en el tiempo. Asimismo, la señal de apoptosis celular tendió a disminuir a través de los tiempos de tratamiento. Conclusiones: los extractos de Sapindus saponaria y Ananas comosus podrían afectar la viabilidad celular inicialmente; sin embargo, estas continúan incrementándose con el paso del tiempo. Al mismo tiempo la señal de apoptosis celular disminuyó a través del tiempo y algo similar sucedió con la citotoxicidad celular, indicando que con el paso de las horas los extractos pueden afectar la proliferación celular al inicio (6 h de tratamiento), pero continúan proliferando.

Evaluación de la estabilidad de Trichoderma sp. y Azotobacter sp. conservados por diferentes métodos / Evaluation of the stability of Trichoderma sp. and Azotobacter sp. preserved by different methods

En el Laboratorio de Microbiología Aplicada de la Universidad Francisco de Paula Santander (Cúcuta, Colombia) constantemente ingresan al Banco de Cepas, cultivos microbianos de interés biotecnológico, especialmente del sector agrícola, los cuales son utilizados en las actividades de docencia e investigación. Por esta razón, existe el interés de mantener viables a través del tiempo estos cultivos microbianos, para lo cual se realizó en esta investigación, la evaluación de la estabilidad de los aislados de Trichoderma sp. y Azotobacter sp., utilizando las técnicas de conservación en viales con solución salina estéril (0,85% NaCl) en refrigeración (4°C) y temperatura ambiente (30°C), suelo estéril en refrigeración (4°C), comparados con la metodología de repiques sucesivos como tratamiento control. Los resultados no mostraron diferencias significativas según el Test de Duncan (P≤0,05) en la tasa de supervivencia microbiana entre los métodos de conservación. Sin embargo, se observó en las técnicas de viales con solución salina estéril y suelo estéril mantenidos en refrigeración, mayor estabilidad en la concentración celular durante los cuatros meses de evaluación, sin registrar contaminación en los cultivos. Así mismo, se registró un óptimo crecimiento macroscópico de los cultivos microbianos y sus características microscópicas se mantuvieron estables en estos dos métodos de conservación. Por esta razón, se seleccionaron como técnicas de conservación de estos microorganismos, teniendo en cuenta además, ventajas como la facilidad de la técnica, disponibilidad de equipos, materiales y personal con los que se cuenta en el laboratorio.

In the Laboratory of Applied Microbiology of the University Francisco de Paula Santander (Cúcuta, Colombia), strains of microbial cultures of biotechnological interest are constantly entering, particularly from the agricultural sector, which are used for teaching and research activities. There is an interest in keeping them viable over time, which was the main reason of this research: To evaluate the stability of the isolates of Trichoderma sp. and Azotobacter sp., using different conservation techniques: vials with saline solution (0,85% NaCl) in two temperature conditions: refrigeration (4°C) and room temperature (30°C), sterile soil under refrigeration (4°C), and successive peals methodology as the control treatment. Results showed no significant differences according to Duncan test (P ≤ 0.05) in the microbial survival ratio between preservation methods. However, a greater stability in cell concentration was observed with the techniques of vials with sterile saline solution and sterile soil -both under refrigeration-, during the four-month evaluation, with no register of contamination on cultures. Also, there was an optimum growth of microbial cultures macroscopically and the microscopic characteristics were stable in these two methods of preservation for both strains. For this reason, we suggest these conservation techniques for the two microorganisms, considering further advantages such as ease of technology, availability of equipment, materials and personnel available in the laboratory.

Cultivo de células estromales de rata. Influencia del suero fetal bovino / Stromal rat cell culture. Influence of fetal calf serum

Las células madre estromales humanas y de roedores cultivadas pueden ser inducidas a diferenciarse en neuronas, enfatizando su utilidad potencial en la terapia celular neurorrestaurativa. Los sistemas de cultivo para la expansión de estas células describen el uso de diferentes proporciones de suero fetal, lo que motivó a estudiar qué concentración de suero fetal bovino era capaz de garantizar un adecuado rendimiento celular. Las células de la médula ósea de rata se cultivaron en medio a-MEM suplementado con 10 y 20 por cientode suero fetal bovino y se subcultivaron hasta 3 veces. La viabilidad celular de los cultivos primarios y los subcultivos estuvo por encima del 98 por ciento en ambos experimentos. Los cultivos primarios demoraron 17,4 días en confluir y los subcultivos 7,7 días. La concentración de suero fetal al 20 por ciento no aumentó significativamente la velocidad de multiplicación celular; no obstante, se obtuvo un mayor número de células estromales. El sistema de expansión in vitro podría utilizarse en estudios futuros para la expansión de las células estromales humanas, lo que sienta mejores bases para su aplicación clínica

Cultured human and rodents stromal stem cells can be induced to differentiate into neurons, emphasizing its potential use in neurorestorative cell therapy. Cropping systems for the expansion of these cells describe the use of different ratios of fetal serum, which led to study what concentration of fetal calf serum was able to ensure an adequate cell yield. Cells from rat bone marrow were cultured in medium supplemented with a-MEM 10 and 20 percent fetal bovine serum and subcultured up to 3 times. Cell viability of primary cultures and subcultures was above 98 percent in both experiments. Primary cultures converge delayed in 17.4 days and 7.7 days subcultures. The concentration of 20 percent fetal calf serum did not significantly increase the speed of cell division, however, we obtained a greater number of stromal cells. The expansion in vitro system could be used in future studies for the expansion of human stromal cells, which feels better basis for clinical application

Estudio comparaiivo de los métodos de resazurin y mtt en estudios de citotoxiccidad en líneas celulares tumorales humanas / Estudi comparatiivo de los métodos de esazurina y mtt en estudios de citotoxicidad en líneas celulares tumorales humanas

Se realizó un estudio comparativo de los métodos de resazurina y MTT como indicadores de medida indirecta de sobrevivencia celular, aplicables para la estimación de actividad citotóxica, con el fin de establecer la idoneidad de cada uno de los dos sistemas de detección, a través de la valoración de citotoxicidad sobre tres líneas celulares derivadas de tumores humanos: HEp-2, HT-29 y HeLa, evaluando tres compuestos sintéticos durante un periodo de tratamiento de 48 horas, usando como referencia de actividad Doxorrubicina HCl, un agente antineoplásico. Los resultados obtenidos por los dos métodos revelaron comportamientos semejantes en las condiciones estudiadas en las líneas celulares.

A study was carried comparing the resazurina and MTT methods as indicators of indirect measure of cellular survival applied to valuated cytotoxic activity in order to assess the suitability of each of the two detection systems. The comparison was made through the valuation of cytotoxicity on three cell lines derived from human tumors: HEp-2, HT-29 and HeLa, evaluating three synthetic compounds during a treatment period of 48 hours using as a reference activity Doxorubicin HCl. The results obtained by the two methods showed a similar performance under the conditions tested in cell lines.